新型冠狀病毒（2019-nCoV）檢測(cè)方法介紹-蛋白檢測(cè)

冠狀病毒外形呈球形，在病毒包膜外有明顯的棒狀膜外粒子，膜外粒子形狀酷似中世紀(jì)歐洲帝王王冠的結(jié)構(gòu)，因此得名“冠狀病毒”。冠狀病毒主要由核酸基因（RNA）以及有基因編碼的外殼蛋白兩部分組成。外殼蛋白包括棘突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）以及核衣殼蛋白（N蛋白）組成。其結(jié)構(gòu)圖如下：

2019新型病毒是目前發(fā)現(xiàn)的第七種感染人體的冠狀病毒。通過對(duì)新冠病毒編碼的蛋白進(jìn)行檢測(cè)，可判定患者是否被感染。蛋白檢測(cè)主要依賴于ELISA技術(shù)平臺(tái)及免疫層析技術(shù)平臺(tái)。

ELISA檢測(cè)平臺(tái)

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)）是利用酶的高效催化放大作用與特異性抗原-抗體反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。根據(jù)檢測(cè)原理的不同可分為直接法、間接法、雙抗夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法四種。2019-nCoV蛋白使用雙抗夾心法進(jìn)行檢測(cè)，其實(shí)驗(yàn)流程為：

1. 將配對(duì)抗體中的一株抗體固定至固相載體表面，并保持其免疫活性；
2. 將另一株抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗體，此酶標(biāo)抗體既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
3. 測(cè)定時(shí)將待測(cè)樣本固相載體孵育，形成抗原-抗體復(fù)合物，再通過洗滌將未與固相載體結(jié)合的物質(zhì)分開；
4. 加入酶標(biāo)抗體，通過反應(yīng)結(jié)合到固相載體上（此時(shí)固相載體上為“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，即雙抗夾心）；
5. 加入酶反應(yīng)底物，底物被酶催化后顯色，根據(jù)顏色深淺可以定性分析是否含有2019-nCoV抗原。

免疫層析技術(shù)

免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)利用了抗原抗體特異性結(jié)合的特性，首先將能夠同時(shí)結(jié)合同一抗原的一對(duì)抗體分別固定于免疫層析檢測(cè)試紙條的檢測(cè)線（T線）與結(jié)合墊上，結(jié)合墊上的抗體帶有顯色標(biāo)記（熒光標(biāo)記或膠體金標(biāo)記）。在試紙條滴樣處滴加樣品，樣品會(huì)向試紙條另一端流動(dòng)，當(dāng)流動(dòng)至結(jié)合墊，樣品中的抗原會(huì)和結(jié)合墊上的標(biāo)記抗體結(jié)合，形成“標(biāo)記抗體-抗原”復(fù)合物，當(dāng)樣品流動(dòng)至檢測(cè)線時(shí)，抗原會(huì)被T線上的抗體捕獲，形成“標(biāo)記抗體-抗原-捕獲抗體”復(fù)合物，隨著T線上捕獲抗原的不斷增加，T線會(huì)出現(xiàn)愈加明顯的顏色變化。如果T線出現(xiàn)顏色變化，則說明待測(cè)樣本中含有待測(cè)抗原。

常見檢測(cè)平臺(tái)

• 1. 膠體金平臺(tái)
• 2. 免疫熒光平臺(tái)

ELISA檢測(cè)與免疫層析檢測(cè)方法對(duì)比

ELISA檢測(cè)具有技術(shù)可靠、試劑方便易得、靈敏度更高等優(yōu)點(diǎn)，免疫層析檢測(cè)具有測(cè)定更為方便、快速、不需要儀器，隨到隨測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

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• SAA單克隆抗體
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