體外診斷試劑原料專(zhuān)題

體外診斷是醫(yī)療器械行業(yè)的一個(gè)分支。在體外診斷領(lǐng)域檢測(cè)對(duì)象、方法學(xué)和技術(shù)路線(xiàn)眾多，新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，但免疫檢測(cè)的方法一直是體外診斷領(lǐng)域最重要的技術(shù)。利用抗原、抗體的特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)，從20世紀(jì)60年代利用同位素，到20世紀(jì)80年代利用酶，再到20世紀(jì)90年代利用化學(xué)發(fā)光對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行放大，相關(guān)技術(shù)路線(xiàn)不斷演進(jìn)，超過(guò)了50年的歷史。最早以放射性核素作為標(biāo)記物的放射免疫檢測(cè)技術(shù)是美國(guó)醫(yī)學(xué)家耶洛和柏森于1959年建立的。標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展極大地提高了免疫檢測(cè)方法的靈敏度，其后出現(xiàn)的非放射性核素如酶、元素、發(fā)光物和元素化合物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)，使免疫檢測(cè)進(jìn)入到了自動(dòng)化檢測(cè)的時(shí)代。如今，免疫檢測(cè)方法已在臨床廣泛應(yīng)用于疾病篩查、診斷、治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估等方面。

抗體、抗原是免疫檢測(cè)試劑核心反應(yīng)原材料，是體外診斷試劑質(zhì)量水平的重要決定因素，影響著體外診斷試劑靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等各項(xiàng)性能。檢測(cè)特異性（assay specificity）是抗體僅對(duì)分析物產(chǎn)生可檢測(cè)性反應(yīng)的能力,交叉反應(yīng)性（cross-reactivity）與之相對(duì)，描述了抗體對(duì)分析物以外物質(zhì)的反應(yīng)能力。在免疫計(jì)量分析法的設(shè)計(jì)中，抗體對(duì)內(nèi)源性分析物的交叉反應(yīng)性（cross-reactivity）評(píng)估是必不可少的。許多蛋白質(zhì)具有與高度保守的表位密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)。如果捕獲抗體或檢測(cè)抗體與交叉點(diǎn)反應(yīng)物結(jié)合，則檢測(cè)結(jié)果偏低；當(dāng)捕獲、檢測(cè)抗體均與交叉反應(yīng)物結(jié)合時(shí)，檢測(cè)結(jié)果偏高。影響免疫檢測(cè)的因素有很多，除了抗體的交叉反應(yīng)性還有：

1、抗體的物理掩蔽

抗體的物理掩蔽通常僅出現(xiàn)在固相抗體系統(tǒng)中，抗體包被在疏水聚合物為主的表面上。某些采血裝置中所用的脂質(zhì)和硅油有時(shí)會(huì)與固相產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致抗體物理掩蔽。

2、抗體結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)像改變

由于樣本引起的反應(yīng)體系中離子強(qiáng)度或pH的變化，或者是由于預(yù)提取樣本時(shí)殘留的有機(jī)溶劑，抗體結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)像可能發(fā)生改變。

3、嗜異性抗體（heterophilic antibodies）

人體樣本中的抗動(dòng)物IgG抗體可能與試劑抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，特別是來(lái)自相同物種的試劑抗體，如小鼠單克隆抗體。嗜異性抗體與捕獲抗體和結(jié)合抗體的反應(yīng)可形成穩(wěn)定的、可檢測(cè)的抗體復(fù)合物，與分析物正常反應(yīng)形式的抗體復(fù)合物類(lèi)似。

4、抗原構(gòu)像的改變

許多蛋白質(zhì)含有二價(jià)離子結(jié)合位點(diǎn)，血清或EDTA血漿中存在鎂或鈣離子，在溶液中一些藥物和其他半抗原與二價(jià)陽(yáng)離子形成復(fù)合物，可能導(dǎo)致抗原構(gòu)像改變。

5、結(jié)合態(tài)分析物的置換

在檢測(cè)游離小分子（如甲狀腺素T4或三碘甲狀腺原氨酸T3）的時(shí)，如果某些物質(zhì)能夠?qū)⒔Y(jié)合態(tài)小分子從結(jié)合位點(diǎn)置換出來(lái)，就會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。如非酯化脂肪酸在樣品儲(chǔ)存時(shí)，容易形成酯化脂肪酸，這類(lèi)分析物就會(huì)使激素與蛋白結(jié)合點(diǎn)脫離，從而影響檢測(cè)。

6、低劑量鉤狀效應(yīng)（low-dose hook）

低劑量鉤狀效應(yīng)偶爾會(huì)在競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)法中遇到，特別是在那些放射性檢測(cè)法中，其抗原被標(biāo)記到一個(gè)非常高的比活性。對(duì)于低濃度分析物，抗原抗體結(jié)合可以超過(guò)零濃度時(shí)的結(jié)合。這種現(xiàn)象歸因于抗體對(duì)抗原的正協(xié)同結(jié)合。

7、高劑量鉤狀效應(yīng)（high-dose hook）

高劑量鉤狀效應(yīng)僅限于一步免疫計(jì)量分析法（夾心法），特點(diǎn)是在分析物濃度非常高時(shí)信號(hào)反而降低。這是由于分析物濃度過(guò)高，捕獲和檢測(cè)抗體同時(shí)飽和，阻止了可檢測(cè)的夾心復(fù)合物的形成。高劑量鉤狀效應(yīng)主要影響捕獲抗體濃度有限的固相檢測(cè)法和分析物濃度范圍非常寬的檢測(cè)法，如腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。