膠體金技術(shù)常用方法

膠體金技術(shù)是一種將抗原抗體免疫反應(yīng)與膠體金標(biāo)記示蹤技術(shù)結(jié)合用于抗原、抗體含量定性定量檢測的技術(shù)。由于其快速、簡便、成本低、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，膠體金法檢測在臨床檢測領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

目前，膠體金檢測平臺(tái)常用的檢測方法有雙抗夾心法、競爭法、間接法等，不同檢測方法檢測原理及適合檢測的物質(zhì)不同，下面分別對(duì)這些方法做一介紹。

雙抗夾心法

雙抗夾心法是膠體金檢測平臺(tái)最常用的檢測方法，主要用于檢測比較大的生物分子及顆粒性抗原。雙抗夾心法需要準(zhǔn)備待測抗原的配對(duì)抗體，一個(gè)抗體用膠體金標(biāo)記并固定在結(jié)合墊上，另一個(gè)抗體固定在NC膜的檢測線（T線）上。另外，還需要準(zhǔn)備能與金標(biāo)抗體（即膠體金標(biāo)記抗體）特異結(jié)合的二抗并固定于NC膜的控制線（C線）上。

圖1：雙抗夾心法膠體金檢測原理

圖2：雙抗夾心法膠體金檢測結(jié)果

當(dāng)待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過層析作用，液體依次會(huì)運(yùn)動(dòng)至結(jié)合墊、T線、C線，每個(gè)階段的反應(yīng)如下表所示：

因此，當(dāng)試劑條上顯示兩條紅線時(shí)，表示樣品中待測物質(zhì)呈陽性；當(dāng)試劑條上只有一條紅色時(shí)，表示樣品中待測物質(zhì)呈陰性。待測物質(zhì)濃度越高，T線顯色強(qiáng)度越強(qiáng)。

競爭法

小分子抗原很難制備得到配對(duì)抗體（分子量小，很難找到兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)供兩個(gè)抗體同時(shí)結(jié)合），因此小分子抗原無法用雙抗夾心法進(jìn)行檢測。對(duì)于小分子抗原，通常利用競爭法進(jìn)行檢測。

使用競爭法的膠體金檢測平臺(tái)，在試劑條的結(jié)合墊上固定的是金標(biāo)抗體，NC膜上T線固定的是大分子偶聯(lián)的待測抗原（小分子抗原不能直接固定于NC膜上，因此需要通過化學(xué)方法把小分子偶聯(lián)到BSA等大分子物質(zhì)上再固定與NC膜上），C線上固定的是能與金標(biāo)抗體特異性結(jié)合的二抗。

圖3：競爭法膠體金檢測原理

圖4：競爭法膠體金檢測結(jié)果

當(dāng)待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過層析作用，液體依次會(huì)流經(jīng)結(jié)合墊、T線、C線，每個(gè)階段的反應(yīng)如下表所示：

因此，如果試劑條上有兩條線，則說明樣品中待測物質(zhì)呈陰性；如果試劑條上有一條線，則說明樣品中待測物質(zhì)呈陽性。樣品中待測物質(zhì)濃度越高，T線顯色強(qiáng)度越弱。

間接法

間接法主要用于檢測抗體。如果膠體金檢測平臺(tái)使用的是間接法，則試劑條的結(jié)合墊上固定的是帶有膠體金標(biāo)記的Protein A（Protein A能夠與抗體非特異性結(jié)合），NC膜上的T線固定的是能與待測抗體特異性結(jié)合的抗原，NC膜上的C線固定的是抗Protein A抗體。

圖5：間接法膠體金檢測原理

圖6：間接法膠體金檢測結(jié)果

當(dāng)待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過層析作用，液體依次會(huì)流經(jīng)結(jié)合墊、T線、C線，每個(gè)階段的反應(yīng)如下表所示：

因此，如果試劑條上有兩條線，說明樣品中待測物質(zhì)呈陽性；如果試劑條上有一條線，說明樣品中待測物質(zhì)呈陰性。樣品中待測物濃度越高，T線顯色強(qiáng)度越強(qiáng)。

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